霍夫曼調(diào)制相襯(Hoffman Modulation Contrast，簡稱HMC)是ROBERT HOFFMAN教授于1975年提出的一種觀察方式①，是基于斜照明技術(shù)加入偏振鏡、狹縫光闌和調(diào)制器改進而來的一種透明樣品觀察技術(shù)，特點是有三維立體感，且適用于塑料培養(yǎng)皿，有人稱之為“窮人的DIC”，主要用于IVF注射等顯微操作。

一、成像原理

斜照明（Oblique Illumination）技術(shù)又稱離軸照明（Off-Axis Illumination），是一種非常古老的顯微鏡技術(shù)，1866年由德國物理學家August Toepler提出③，并由阿貝聚光鏡的發(fā)明者Ernst Abbe完善，基本思路是利用偏軸光照射樣品，然后經(jīng)過透明樣品發(fā)生衍射、反射和折射，最終除了未衍射的0級光，還能把一兩個臨近級別的衍射光（1級和-1級）用到成像中，從而提升分辨率和焦深，形成浮雕樣式的立體成像，因此這種觀察方式又稱浮雕相襯（Relief Contrast，簡稱RC）。斜照明很多地方跟簡易透射暗場相近，只是它的光闌不是環(huán)形的，而是半圓或其他狹縫形狀，有更強方向性。題外話一句，極紫外光刻EUV也使用了斜照明技術(shù)。

霍夫曼調(diào)制相襯在斜照明基礎(chǔ)上加入了三個部件，偏振鏡，狹縫聚光鏡和物鏡調(diào)制器，使部分衍射光的強度大于背景光，部分衍射光的強度小于背景光，這樣就形成更高對比度的立體成像。

當前霍夫曼調(diào)制相襯的專利已經(jīng)過了保護期，四大品牌都推出了自己的HMC技術(shù)，奧林巴斯Evident叫浮雕相襯RC（Relief Contrast，繼承以前RPC的命名），尼康叫高級調(diào)制相襯NAMC（Nikon Advanced Modulation Contrast），蔡司叫改進型調(diào)制相襯iHMC（Improved Hoffman Modulation Contrast），徠卡叫整合調(diào)制相襯IMC（Integrated Modulation Contrast），除了徠卡的是特有的機身調(diào)制器取代物鏡調(diào)制器，其他跟原始設(shè)計差距不大。

二、關(guān)鍵部件

典型霍夫曼相襯需要三個部件，偏振鏡，霍夫曼聚光鏡（帶狹縫光闌），霍夫曼物鏡（帶物鏡調(diào)制器）。

光源偏振鏡，偏振鏡在光源和聚光鏡之間，相當于一個起偏器，它可以旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)后可以調(diào)整成像的立體感和對比度。

霍夫曼聚光鏡（帶狹縫光闌），霍夫曼聚光鏡又稱狹縫聚光鏡，一般采用轉(zhuǎn)盤式設(shè)計，按照10X/20X/40X三個倍數(shù)有不同的狹縫光闌裝在聚光鏡前焦面，另有留空孔用于明場觀察。聚光鏡狹縫光闌分為三個部分：占大部分的暗區(qū)，不透光；離軸的狹縫，100%透光；狹縫檢偏器，連著狹縫，尺寸跟狹縫相近，旋轉(zhuǎn)光源偏振鏡會改變這個區(qū)域的通光率，可以改變成像立體感和對比度。

霍夫曼物鏡（帶物鏡調(diào)制器），霍夫曼物鏡跟相襯物鏡相似，在物鏡后端的后焦平面上嵌入了精密的物鏡調(diào)制器，這個調(diào)制器不能移動不能取出。物鏡調(diào)制器分成三個區(qū)域：在邊緣的暗區(qū)，透射1%光線；狹窄的灰區(qū)，透射10-15%光線；透明區(qū)，連著灰區(qū)，100%透光。霍夫曼物鏡能用于明場、暗場和熒光觀察，但用在熒光觀察時效果不佳，因為有調(diào)制器，其透光率低于普通明場物鏡。

注意：霍夫曼的狹縫光闌和物鏡調(diào)制器有很強的方向匹配關(guān)系，物鏡擰緊后，需要調(diào)整聚光鏡狹縫方向來匹配，非專業(yè)人士請不要調(diào)霍夫曼物鏡或聚光鏡，否則很難調(diào)節(jié)回最佳狀態(tài)。

另外整合調(diào)制相襯IMC的物鏡調(diào)制器設(shè)置在了物鏡后焦面的共軛面上，也就是在機身內(nèi)置而非物鏡內(nèi)置，因此可以使用霍夫曼物鏡以外的物鏡。但必須提醒的是，IMC是組合消色差設(shè)計，物鏡與觀察頭是成套搭配實現(xiàn)消色差的，隨便換物鏡可能破壞消色差設(shè)計導致效果不佳。