什么是熒光？

熒光是一種分子現(xiàn)象，一種物質(zhì)吸收某種顏色的光，與此同時(shí)輻射另外一種顏色的光，后者能量更低，波長(zhǎng)更長(zhǎng)，這種過(guò)程被稱(chēng)為激發(fā)和發(fā)射，很多物質(zhì)都會(huì)表現(xiàn)出一定的熒光特征。在早期，觀察的都是初級(jí)熒光或自發(fā)熒光，但是現(xiàn)在已經(jīng)開(kāi)發(fā)出許多染料，他們能夠發(fā)出很亮的熒光，可以用來(lái)給樣品某些部分染色，這種方法叫次級(jí)或間接熒光，這些染料叫熒光染料，當(dāng)與抗體和核酸等其他有機(jī)物質(zhì)軛和時(shí)，稱(chēng)為熒光探針和熒光團(tuán)。

熒光是怎么產(chǎn)生的？

熒光染料吸收特定的波長(zhǎng)的光（激發(fā)光）的照射，與此同時(shí)釋放出特定波長(zhǎng)的光（發(fā)射光），熒光染料所需要的激發(fā)光是特定波長(zhǎng)的，發(fā)射熒光也是特定波長(zhǎng)的，發(fā)射光的波長(zhǎng)大于激發(fā)光的波長(zhǎng)（短波激發(fā)長(zhǎng)波）。

熒光光譜

激發(fā)光譜通過(guò)測(cè)量熒光物質(zhì)的熒光發(fā)射強(qiáng)度隨激發(fā)波長(zhǎng)變化而獲得的光譜，發(fā)射光譜反映熒光物質(zhì)的熒光發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射光波長(zhǎng)之間相互關(guān)系的光譜曲線。

熒光顯微鏡和熒光濾塊

熒光顯微鏡是利用熒光特性進(jìn)行觀察、成像的光學(xué)顯微鏡，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)、植物學(xué)、微生物學(xué)、病理學(xué)、遺傳學(xué)等各領(lǐng)域。熒光成像具有高靈敏度和高特異性的優(yōu)點(diǎn)，非常適合進(jìn)行特定蛋白、細(xì)胞器等在組織及細(xì)胞中的分布的觀察，共定位和相互作用的研究等。熒光顯微鏡大致主要分為正置熒光顯微鏡、倒置熒光顯微鏡、體視熒光顯微鏡。

熒光濾塊是熒光成像中的重要部件，主要有激發(fā)濾片、發(fā)射鋁片、二向分光鏡組成，安裝在激發(fā)塊盒子里。激發(fā)濾片選擇激發(fā)光來(lái)激發(fā)樣品，阻擋其他波長(zhǎng)的光；通過(guò)激發(fā)濾片的光經(jīng)過(guò)二向分光鏡（其作用是反射激發(fā)光和透射熒光），反射后通過(guò)物鏡聚焦，照射到樣品，激發(fā)出對(duì)應(yīng)的熒光即發(fā)射光，發(fā)射光被物鏡收集，透過(guò)二向分光鏡，到達(dá)發(fā)射濾片。而熒光濾塊一般又可分為長(zhǎng)通（LP）和帶通（BP），帶通通常由中心波長(zhǎng)和區(qū)間寬度確定，如530/40nm表示可通過(guò)510-550nm的光。長(zhǎng)通濾色片如510 LP，表示可以通過(guò)波長(zhǎng)長(zhǎng)于510nm的光。